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为医疗器械植入物病理从业人员间的交流学习,领先医疗病理学老师为大家分享含医疗器械植入物组织切片制备和阅片经验。对于该类病理组织切片的制备,会有哪些难点及应注意的地方?例如,如何取材,固定和脱水?
1.含医疗器械植入物的组织取材具有一定的局限性,比如,为了观察完整的植入物,则必须将整个植入物连带组织一起取下,因为大多数时候,植入物是金属的,在取材的时候也不方便切割成小块样品,这是有别于常规软组织切片(石蜡、冰冻)取材的地方。
2.血管支架等中空器管,通常需要在取样前,使用福尔马林灌注充分固定,才能切取样品。
3.取材的大小决定了固定和脱水的时间,一般使用10%多聚甲醛溶液固定24h以上即可,大块样品可以适当延长固定时间。
4.对于不同样品可选用不同的脱水策略,例如,血管支架样品是中空结构,梯度酒精脱水和透明可在一天内完成;肌肉植入样品可延长低浓度酒精脱水时间,因透明会引起肌肉组织的明显收缩,所以,透明后即刻渗透为宜,不可长时间透明。
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包埋的方式如何选择?
一般常用环氧树脂或甲基丙烯酸酯类进行包埋,在此我们分享下甲基丙烯酸酯的使用经验。甲基丙烯酸酯可用于常温渗透包埋,也可用于低温渗透包埋。
1.常规包埋:甲基丙烯酸甲酯和邻苯二甲酸二丁酯混合液可用于常温包埋,以过氧化苯甲酰作为催化剂,这种方法能在1天内实现固化,优点是适用于需在短时间内取得结果的样品。缺点是固化后包埋块较硬,在切割的过程中容易破碎,染料不容易渗透进组织,染色慢,聚合固化的过程中产热快,容易形成气泡,影响切片效果,同时对组织有一定的热损伤。
2.低温包埋:甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸丁酯可用于低温包埋,以苯甲酸甲酯作为抗原保护剂,过氧化苯甲酰作为催化剂,聚乙二醇-作为塑化剂,这四种试剂在组织渗透时使用,包埋时以N,N-二甲基对甲苯胺作为加速聚合引发剂,渗透和包埋均可在低温下进行。此方法优点是使用小量的催化剂即可起到固化作用,对于特殊金属样品影响较小(过氧化苯甲酰属于强氧化剂),固化后硬度及韧性适中,方便切片,低温包埋固化缓和,不易产生气泡、对于组织无热损伤,切片也易于染色,固化时间适中(2~3天),组织抗原保护好,适合用于免疫组织化学染色。
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三、如何读片?
含医疗器械植入物组织切片主要是为了评估植入物自身或降解引起的组织反应,评估产品的安全性和有效性。阅片时主要观察植入物周围的炎性细胞类型和数量,如中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、异物巨细胞、吞噬细胞、脂肪细胞、新生毛细血管等,以及有无坏死、变性和水肿等异常发生。如果是支架类样品,除以上观察指标外,还需测量血管管腔面积、新生内膜面积、中膜面积,半定量评估内、外弹力板损伤积分、新生内膜纤维沉积、炎性积分等指标。有时还需观察支架内皮化、支架内血栓、成纤维母细胞、肉芽肿、血管瘤等。
案例分享
图一上:冠脉支架植入硬组织切片全景图
图一下:冠脉支架植入硬组织切片局部放大图
冠脉支架植入:临床前动物实验研究中,常常在猪的冠状动脉内植入研究支架,观察支架对植入冠脉组织反应,评估支架的安全性和有效性,通过硬组织切片能使支架杆完整的保留在血管壁中,并且制成的切片不损坏血管原本的形态,排除人为制片导致的损伤因素,支架杆周围组织染色清晰明亮、色彩艳丽,内弹力板和外弹力板清晰,支架杆周围炎性细胞形态清楚,容易识别。病理形态学测量按参考文献进行则可,组织病理描述,则按镜下观察所见进行描述和评估即可。
参考文献
1.SchwartzRS,HuberKC,MurphyJG,etal.Restenosisandtheproportionalneointimalresponsetocoronaryarteryinjury:resultsinaporcinemodel.JAmCollCardiol;19:-
2.KornowskiR,HongMK,TioFO,BramwellO,WuH,LeonMB.In-stentrestenosis:Contributionsofinflammatoryresponsesandarterialinjurytoneointimalhyperplasia.JAmCollCardiol;31:–
3.Schwartz,etal,Drug-ElutingStentsinPreclinicalStudiesRe白癜风有什么特效药北京市中科医院好不好
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