研究建立台盼蓝-伊红染色法，并用于强酸脱钙后的骨组织病理切片染色，以提高制片质量。方法对10只大鼠胫骨进行5％硝酸脱钙、石蜡包埋、连续切片后，对每份胫骨标本分别进行苏木素一伊红染色和甲苯胺蓝染色及TE染色，比较不同染色方法的骨组织病理切片显微结构染色的差异。
背景
骨组织内含大量钙盐。在病理组织切片制作过程中，常规组织脱水透明处理前，需将骨组织中钙盐去除，才可以制成清晰的病理组织切片，用于观察骨组织结构及骨组织细胞。传统的脱钙方法主要有酸类脱钙液、螯合剂脱钙液等。EDTA脱钙液进行骨组织脱钙对骨组织的细胞结构破坏小、染色效果好，但该方法脱钙耗时长，使用不方便。因而人们尝试用耗时短、使用便捷的不同酸类脱钙液对骨组织进行脱钙，得到推广应用。病理组织制片中最常用最基本的染色方法为苏木素-伊红染色，苏木素能将细胞核、染色体、着丝粒、中心体、线粒体、髓鞘等染成蓝色，但是在酸性环境下核染色会迅速变成红色，因而HE不适宜用于呈酸性的组织染色。另一种染色方法甲苯胺蓝染色，是骨组织制片常用的染色方法，本研究发现，这两种方法均难以达到清晰而稳定的制片效果。在省时的同时，制成符合病理要求的骨组织病理切片成为一个亟待解决的问题。
台盼蓝是常用的细胞活性鉴定染料，活细胞细胞膜结构完整，能排斥台盼蓝，而不着色；死细胞由于膜完整性受损，通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色，可鉴别死细胞。同时，有研究用台盼蓝染液于体外培养的成骨细胞、破骨细胞及间充质干细胞等骨组织细胞的染色，可鉴定细胞凋亡情况。
结果
一、不同染色的骨组织形态
1．HE染色骨组织形态：如图1所示，在20倍显微镜下，检测骨组织HE染色病理切片，观察骨组织整体染色为红色，骨小梁和皮质骨被染为浅红色，骨髓组织呈深红色，骨小梁与骨髓组织边界不清。生长板不着色，骨骺区与生长板边界不清晰，生长板宽度不明显。表明HE染色不能清晰区分酸处理过骨组织细胞与骨小梁。
2．TB染色骨组织形态：如图2所示，在20倍显微镜下，骨组织经TB染色的病理切片可见骨组织整体染色为蓝色，骨小梁被染为紫蓝色，骨髓组织呈淡蓝色，且骨小梁着色不均匀。生长板被染为蓝紫色，骨骺区与生长板之间的界限清晰，宽度明显。表明TB染色不适用于酸处理后的骨组织病理切片的制作。
3．TE染色骨组织形态：如图3所示，在20倍显微镜下，骨组织经TE染色的病理切片可见骨小梁被染为浅红色，骨髓组织呈红褐色和深蓝色相间，骨小梁与骨髓组织的边界清晰。生长板不着色，生长板与骨骺区之间边界清晰，生长板宽度明显。表明TE染色法可以区分骨组织细胞与骨小梁，适用于强酸处理后的骨组织的病理切片的制作。
二、不同染色的骨组织细胞的形态
1．HE染色骨组织细胞形态：如图4所示，在倍显微镜下，骨组织切片经HE染色，可见骨小梁和骨髓结构的骨小梁上骨陷窝形态不清晰，边界不明显，未见苏木素蓝染的骨髓细胞细胞核，难以辨别不同类型的骨组织细胞形态。说明用HE染色法处理后，组织骨组织细胞核没有着色，因此HE染色法可能不适用于强酸处理过的骨组织病理切片制作。
2．TB染色骨组织细胞形态：如图5所示，在倍显微镜下，经骨组织切片TB染色，可见骨小梁上无结构形态清晰的骨陷窝，骨组织细胞核无明显可辨的着色，无法分辨骨组织细胞和骨髓细胞形态结构。说明TB染色可能不适用于强酸处理过的骨组织病理切片的制作。
3．TE染色骨组织细胞形态：如图6所示，在倍显微镜下，经骨组织切片TE染色，可见切片上骨小梁与骨髓组织边界清晰，骨小梁上骨陷窝和骨细胞结构清晰，骨小梁表面附着的成骨细胞和破骨细胞的结构、边界、定位清晰可辨，骨髓细胞中可见血系细胞和多核巨噬细胞。说明TE染色方法可以清楚区分不同骨组织细胞，更适用于强酸处理过的骨组织病理切片的制作。
结论
总之，本研究建立的TB染色法，用于强酸脱钙后的骨组织切片标本染色制片时，骨小梁结构清晰可见，骨组织细胞边界清楚，细胞内细胞核包浆分色明显，适于在酸脱钙后骨组织病理学切片中推广应用。
编辑：Fly
审核：小颉
参考文献：
刘洋,柯诗韵,彭方美,等.快速脱钙骨组织病理切片台盼蓝-伊红染色方法研究[J].中华临床实验室管理电子杂志,,5(3):-.DOI:10./cma.j.issn.-..03..
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